dc.contributor.advisor1 | MENESES, Heloisa do Nascimento de Moura | |
dc.date.accessioned | 2024-02-20T21:45:42Z | |
dc.date.available | 2024-02-20T21:45:42Z | |
dc.date.issued | 2019-02 | |
dc.identifier.citation | PEREIRA, Rômulo Jorge Batista. Seleção de genes HOUSEKEEPING para análise de PCR quantitativo do gene GSTM1. Orientadora: Heloisa do Nascimento de Moura Meneses. 2019. 47 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Biotecnologia) – Instituto de Biodiversidade e Florestas, Universidade Federal do Oeste do Pará, 2019. Disponível em: https://repositorio.ufopa.edu.br/jspui/handle/123456789/1385 | pt_BR |
dc.identifier.uri | https://repositorio.ufopa.edu.br/jspui/handle/123456789/1385 | |
dc.description.abstract | Quantitative real-time PCR (qPCR) is a technique that combines the exponential
amplification system of a DNA fragment with the capture of data at the moment the
amplification reaction occurs by means of fluorescence measurements. The qPCR became one
of the most widely used techniques when it comes to gene expression analysis because of its
precision, wide dynamic range, sensitivity, reproducibility. When it’s compared the gene
expression between different samples and / or tissues, it is paramount to consider the aspects
of the experimental variation resulting from the amount of starting material, RNA extraction
and reverse transcription efficiencies. In order to eliminate such variations it’s necessary to
use a normalizing gene to ensure the accuracy of the levels of expression of the assay qPCR.
Therefore, this study aims to select reference genes for gene expression analysis assays of
the GSTM1 family gene. It was collected peripheral blood samples (5 mL) from exposed
individuals and not exposed ones to Mercury (Hg). The RNA extraction was performed,
then cDNA synthesis and qPCR for seven normalizing genes
(ACTB, GAPDH, 18S, HPRT1, B2M, GUSB and TBP). For the analysis of normalization of
the reference genes, It was applied the technique developed by Silver et al. (2016) called
"gene pairs". The results of the present work demonstrate that
the ACTB, GAPDH and B2Mgenes presented better stability to be used as reference genes
for GSTM1 gene studies. | pt_BR |
dc.language | pt_BR | pt_BR |
dc.publisher | Universidade Federal do Oeste do Pará | pt_BR |
dc.rights | Acesso Aberto | pt_BR |
dc.subject | PCR quantitativa | pt_BR |
dc.subject | Genes normalizadores | pt_BR |
dc.subject | GSTM1 | pt_BR |
dc.title | Seleção de genes HOUSEKEEPING para análise de PCR quantitativo do gene GSTM1 | pt_BR |
dc.type | TCC | pt_BR |
dc.contributor.advisor1Lattes | http://lattes.cnpq.br/3672995916961731 | pt_BR |
dc.description.resumo | A PCR em tempo real quantitativa (qPCR) é uma técnica que combina o sistema de amplificação exponencial de um fragmento de DNA com a captação de dados no momento
em que ocorre a reação de amplificação por meio de medidas de fluorescência. A qPCR
tornou-se uma das técnicas mais utilizadas quando se trata da análise de expressão gênica
devido a sua precisão, ampla faixa dinâmica, sensibilidade e reprodutibilidade. Ao se realizar
a comparação de expressão gênica entre amostras e/ou tecidos diferentes, é de suma
importância considerar os aspectos da variação experimental decorrente da quantidade de
material de partida, extração de RNA e eficiências de transcrição reversa. Para eliminar essas
variações é necessário o uso de um gene normalizador para garantir a precisão dos níveis de
expressão do ensaio qPCR. Diante disso, o objetivo do presente trabalho é selecionar genes de
referência para ensaios de análise de expressão gênica do gene da família GSTM1. Foram
coletadas amostras de sangue periférico (5mL) de indivíduos expostos e não exposto ao
Mercúrio (Hg). Foi realizado a extração do RNA, seguida da síntese do cDNA e realizado a
qPCR para sete genes normalizadores (ACTB, GAPDH, 18S, HPRT1, B2M, GUSB e TBP).
Para a análise da normalização dos genes de referência foi aplicado a técnica desenvolvida
por Silver e colaboradores (2006) denominado “pares de genes”. Os resultados do presente
trabalho demonstram que os genes ACTB, GAPDH e B2M apresentaram melhores
estabilidade para serem utilizados como genes de referência para estudos do gene GSTM1. | pt_BR |
dc.publisher.country | Brasil | pt_BR |
dc.publisher.program | Not applicable | pt_BR |
dc.publisher.initials | UFOPA | pt_BR |
dc.subject.cnpq | CNPQ::CIÊNCIAS BIOLÓGICAS | pt_BR |
dc.creator | PEREIRA, Rômulo Jorge Batista | |
dc.publisher.department | Instituto de Biodiversidade e Florestas | pt_BR |