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Título: Dipteryx odorata (Aubl.) Willd. E Dipteryx magnifica (Ducke) Ducke (FABACEAE): caracterização fitoquímica quanto à presença de cumarina e atividades antifúngica e antibacteriana
metadata.dc.creator: SOUSA, Bruna Cristine Martins de
Palavras-chave: Dipteryx odorata;Dipteryx magnifica;Extratos vegetais;Atividade antimicrobiana
Data do documento: 25-Jan-2017
Editor: Universidade Federal do Oeste do Pará
Citação: SOUSA, Bruna Cristine Martins de. Dipteryx odorata (Aubl.) Willd. e Dipteryx magnifica (Ducke) Ducke (FABACEAE): caracterização fitoquímica quanto à presença de cumarina e atividades antifúngica e antibacteriana. Orientador: Lauro Euclides Soares Barata; Coorientadora: Denise Castro Lustosa. 2017. 92 f. Dissertação (Mestrado em Recursos Naturais da Amazônia) - Programa de Pós-graduação em Recursos Naturais da Amazônia, Universidade Federal do Oeste do Pará, Santarém, 2017. Disponível em: https://repositorio.ufopa.edu.br/jspui/handle/123456789/278. Acesso:
Abstract: Dipteryx odorata (Aubl.) Willd. and Dipteryx magnifica (Ducke) Ducke belong to the Fabaceae family and are Neotropical trees originating in Central and South American countries. The fruits of D. odorata stand out in terms of commercial and phytotherapeutic potentials. The seeds for more than a century are commercialized by extractivists from the Amazon and, historically, they have been highly sought after for the extraction of coumarin (main active compound) to flavor tobacco pipes. Dipteryx magnifica, it lacks studies that detail its specific botanical description, chemical composition and biological activities, because this information was not found in the consulted literature. In this sense, the objective of this work was to evaluate the chemical profile of the ethanolic extracts of leaves, branches and fruits (bark, endocarp and seeds) of the species in relation to the presence of coumarin simple and its antimicrobial activity on fungi pathogenic to vegetables and bacteria pathogenic to humans. The extractions were carried out at the Laboratório de Pesquisa & Desenvolvimento de Produtos Naturais Bioativos (P&DBIO), UFOPA, using Soxhlet apparatus and having 96% P.A. ethanol. The total extraction period was 8 h for each procedure and the extracts were fractionated according to the biological activities presented. The chemical analyzes were carried out in the Divisão de Química Orgânica e Farmacêutica, no Centro Pluridisciplinar de Pesquisas Químicas, Biológicas e Agrícolas (CPQBA), UNICAMP, by Thin Layer Chromatography (TLC) and by Gas Chromatography coupled to Mass Spectrometry (GC-MS). The antifungal tests were carried out at the Laboratório de Fitopatologia, UFOPA, in which the extracts were tested in five concentrations: 10%, 20%, 30%, 40% and 50%. Controls consisted of fungus growth only in potato-dextrose-agar medium (negative control) and in PDA culture medium with coumarin addition (positive control). As challengers we had: Cercospora longissima isolated from lettuce; three isolates of Fusarium spp. and Sclerotium rolfsii isolated from chili. The experiments were in DIC, in a factorial scheme, with four replications. The results were compared by the Skott-Knott test at 5% probability. Microbiological testing of MIC (Minimum Inhibitory Concentration) was performed at the Divisão de Microbiologia, CPQBA, UNICAMP, according to the recommendations of the M7-A6 protocol for bacteria (NCCLS, 2003). The microorganisms used in the assay were: Burkholderia cepacia (ATCC 25416); Escherichia coli (ATCC 11775); Pseudomonas aeruginosa (ATCC 13388) and Staphylococcus aureus (ATCC 6538). The extracts were weighed and then each sample was diluted in Mueller-Hinton broth to a concentration of 8 mg.mL-1, containing 10% DMSO (dimethylsulfoxide). The concentrations evaluated were: 2000; 1000; 500; 250; 125; 62.5; 31.25; 15.62; 7.81; 3.91 and 1.95 μg.mL-1 and as a control the antibiotic chloramphenicol - 0.5 mg.mL-1 solution was used. The bacteria contained in the microplates were incubated in a greenhouse at 36±1°C for 24 h and after that time 50 μL of 0.1% solution of 2,3,5-triphenyl-tetrazolium chloride (TTC) And re-incubated for a period of 3 h. The highest yields were obtained on the bark and seeds of the fruits of the species. 1,2-Benzopyrone was isolated and identified in the extracts of the seeds of D. odorata, and in the shells, in the endocarps, and in the seeds of D. magnifica. As for the antifungal action, it was verified that the coumarin isolated presented better action against the isolates obtained from Fusarium spp., and that the extracts of the endocarps of D. odorata and seeds of D. magnifica, provided the lowest growth averages for the phytopathogens tested. As for the antibacterial activity, extracts of D. odorata and D. magnifica obtained from the leaves, branches and seeds did not present bacteriostatic or bactericidal effect for the evaluated pathogens. However, the extracts of the shells and endocarps of the species presented bacteriostatic effect for E. coli in the highest concentration tested. Staphylococcus aureus was also sensitive to the action of D. magnifica bark extract at the concentration of 2.0 mg.mL-1; Confirmed sensitivity after the CBM test (Minimum Bactericidal Concentration). The species under study were promising for the use of their fruits, both for obtaining coumarin, and for alternative control of specific phytopathogens and antibacterial action. The extracts of the shells, endocarps and seeds of D. odorata and D. magnifica will be fractionated, chemically analyzed by TLC and GC-MS, and tested against fungi and sensitized bacteria.
Resumo: Dipteryx odorata (Aubl.) Willd. e Dipteryx magnifica (Ducke) Ducke pertencem a família Fabaceae e são árvores neotropicais originárias de países da América Central e América do Sul. Os frutos de D. odorata destacam-se quanto as potencialidades comerciais e fitoterápicas. As sementes há mais de um século são comercializadas por extrativistas da Amazônia e, historicamente, foram bastante procuradas para a extração de cumarina (principal composto ativo) para flavorizar tabacos de cachimbos. Dipteryx magnifica, carece de estudos que detalhem sua descrição botânica específica, composição química e atividades biológicas, pois estas informações não foram encontradas na literatura consultada. Neste sentido, este trabalho teve por objetivo avaliar o perfil químico dos extratos etanólicos das folhas, galhos e frutos (cascas, endocarpos e sementes) das espécies quanto à presença de cumarina simples e, sua atividade antimicrobiana sobre fungos patogênicos à hortaliças e bactérias patogênicas à humanos. As extrações foram realizadas no Laboratório de Pesquisa & Desenvolvimento de Produtos Naturais Bioativos (P&DBIO), da UFOPA, utilizando aparelho de Soxhlet e tendo como solvente etanol P.A. a 96 %. O período total das extrações foi de 8 h para cada procedimento e os extratos serão fracionados de acordo com as atividades biológicas apresentadas. As análises químicas foram realizadas na Divisão de Química Orgânica e Farmacêutica, no Centro Pluridisciplinar de Pesquisas Químicas, Biológicas e Agrícolas (CPQBA), da UNICAMP, por Cromatografia em Camada Delgada (CCD) e por Cromatografia Gasosa acoplada a Espectrometria de Massa (CG-EM). Os ensaios antifúngicos foram realizados no Laboratório de Fitopatologia, da UFOPA, no qual os extratos foram testados em cinco concentrações: 10%, 20%, 30%, 40% e 50%. Os controles consistiram no crescimento dos fungos apenas em meio de cultura batata-dextrose-ágar (controle negativo) e, em meio de cultura BDA com adição de cumarina (controle positivo). Como desafiantes teve-se: Cercospora longissima isolado de alface; três isolados de Fusarium spp. e Sclerotium rolfsii isolado do pimentão. Os experimentos foram em DIC, em esquema fatorial, com quatro repetições. Os resultados foram comparados pelo teste Skott-Knott a 5% de probabilidade. O ensaio microbiológico de CIM (Concentração Inibitória Mínima) foi realizado na Divisão de Microbiologia, CPQBA, da UNICAMP, segundo as recomendações do protocolo M7-A6 para bactérias (NCCLS, 2003). Os microrganismos utilizados no ensaio foram: Burkholderia cepacia (ATCC 25416); Escherichia coli (ATCC 11775); Pseudomonas aeruginosa (ATCC 13388) e Staphylococcus aureus (ATCC 6538). Os extratos foram pesados e em seguida, cada amostra foi diluída em caldo Mueller-Hinton, para uma concentração de 8 mg.mL-1, contendo 10 % de DMSO (dimetilsulfóxido). As concentrações avaliadas foram: 2000; 1000; 500; 250; 125; 62,5; 31,25; 15,62; 7,81; 3,91 e 1,95 μg.mL-1 e como controle, teve-se o antibiótico cloranfenicol - solução 0,5 mg.mL-1. As bactérias contidas nas microplacas foram incubadas em estufa a 36±1°C por 24 h e após esse período foram depositados em todos os poços 50 μL de solução 0,1 % de cloreto de 2,3,5-trifenil-tetrazólio (CTT) e re-incubadas por um período de 3 h. Os maiores rendimentos foram obtidos nas cascas e nas sementes dos frutos das espécies. A 1,2-benzopirona foi isolada e identificada nos extratos das sementes de D. odorata, e nas cascas, nos endocarpos, e nas sementes de D. magnifica. E no que tange a ação antifúngica, constatou-se que a cumarina isolada apresentou melhor ação frente aos isolados obtidos de Fusarium spp., e que os extratos dos endocarpos de D. odorata e sementes de D. magnifica, proporcionaram as menores médias de crescimento micelial para os fitopatógenos testados. Quanto a atividade antibacteriana, os extratos de D. odorata e D. magnifica obtidos das folhas, galhos e sementes não apresentaram efeito bacteriostático ou bactericida para os patógenos avaliados. No entanto, os extratos das cascas e endocarpos das espécies apresentaram efeito bacteriostático para E. coli na maior concentração testada. Staphylococcus aureus também foi sensível à ação do extrato das cascas de D. magnifica, na concentração de 2,0 mg.mL-1; sensibilidade confirmada após realização do teste de CBM (Concentração Bactericida Mínima). As espécies em estudo mostraram-se promissoras quanto à utilização dos seus frutos, tanto para obtenção de cumarina, como para o controle alternativo dos fitopatógenos específicos e ação antibacteriana. Os extratos das cascas, endocarpos e sementes de D. odorata e D. magnifica serão fracionados, analisados quimicamente por CCD e CG-EM, e ensaiados frente aos fungos e bactérias sensibilizadas.
URI: https://repositorio.ufopa.edu.br/jspui/handle/123456789/278
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