Prospeção e uso de probióticos autóctone isolados do intestino de Colossoma Macropomum no desempenho zootécnico e na profilaxia da aeromonose na larvicultura de Tambaqui
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Universidade Federal do Oeste do Pará
Resumo
This study aimed to investigate the feasibility and effectiveness of
supplementation with strains of lactic acid bacteria isolated from the intestinal microbiota of
healthy tambaqui, on the pathophysiological and zootechnical responses in larvae of the
same species of chal-lenged Aeromonas hydrophila. Ten tambaquis were purchased from
local fishermen from the Amazon River in Santarém-Pa. The animals were euthanized by
deepening the anesthetic plane and the gastrointestinal tract was removed for seeding in a
Petri dish containing TSA and MRS media plus Aniline Blue dye. The culture was obtained
from the direct sowing of stomach and intestinal contents and the mix (intestine + feces). A
total of 11 5 bacterial strains were isolated and characterized to investigate their in vitro
viability and probiotic potential. Initially, Catalase tests and Gram staining were performed,
and 66 of the isolates were positive for lactic acid bacteria. Subsequently, the hemolytic
activity of positive bacilli with negative catalase was evaluated, in which 5 did not present
he-molysis, and these were selected for the other analyses (I3, I1 0, F4, M1 3, and M1 4).
For the probiotic characterization of the bacteria, the viability and growth of lactic acid
bacteria were verified at different pH values (2.0, 3.0, 4.0, 5.0, 6.0, 7.0, 8.0, and 9.0) for 1 2
h, as well as bile resistance, antagonist activity, auto- and co-aggregation, biofilm
formation, antibiogram, hydrophobicity, and lyophilization tests. For molecular identification
of the worked species, PCR was performed using three primers: Lac 1 and 2 for
Lactobacillus sp., Bac, and 1 6S for Bacillus sp., and their products were separated by gel
electrophoresis. The in vitro analysis was initially carried out by the pathogenicity test in 30
juvenile tambaquis, divided into 6 groups, 0.5 mL of the isolates was inoculated into the
coelomic cavity, where it was verified that there was no mortality and/or clinical behavioral
alterations or tissues in all animals. In larviculture, better zootechnical performance was
verified in strains I3 and M1 3 in relation to the control, without alteration of
morphophysiological development. Sepsis induced in the larvae improved the survival and
innate immunity of larvae supplemented with M1 3 and M1 4. The preliminary results
obtained in the tests showed that the isolates belonging to the genus Lactobacillus present
characteristics of potential probiotics for tambaqui larvae. Prospecting their technological
and functional potential is extremely important for sustainable aquaculture production.
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O projeto objetivou investigar a viabilidade e a eficácia da suplementação com
linhagens de bactérias lácticas isoladas da microbiota intestinal de tambaqui saudável,
sobre as respostas fisiopatológica e zootécnica em larvas da mesma espécie desafiada
Aeromonas hydrophila. Para tanto, foram adquiridos, de pescadores locais, 1 0 tambaquis,
oriundos do Rio Amazonas, em Santarém-Pa. Os animais foram eutanasiados por
aprofundamento do plano anestésico e retirado o aparelho gastrointestinal para
semeadura em placa de Petri, contendo os meios TSA e MRS acrescido do corante Azul
de Anilina. A cultura ocorreu a partir do semeio direto do conteúdo estomacal, intestinal e
do mix (Intestino + fezes). Foram isoladas 11 5 cepas bactérias, que passaram por
análises de caracterização para investigar a viabilidade e potencial probiótico in vitro.
Inicialmente foi realizado dos testes de Catalase e coloração de Gram, com a obtenção de
66 dos isolados positivas para as bactérias lácticas. Posteriormente, foi avaliada a
atividade hemolítica dos bacilos positivos com catalase negativa, na qual 5 não
apresentaram hemólise, sendo estes selecionados para as demais análises (I3, I1 0, F4,
M1 3, M1 4). Para caracterização probiótica das bactérias foi verificado a viabilidade e
crescimento de bactérias lácticas em diferentes pH (2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0)
por 1 2 horas, bem como testes de resistência a bile, atividade antagonista, auto e
coagregação, formação de biofilme, antibiograma, hidrofobicidade e liofilização. Para
identificação molecular das espécies trabalhadas, foi realizada a PCR utilizando três
primers: Lac 1 e 2, para Lactobacillus sp., Bac e 1 6S para Bacillus sp. e seus produtos
foram separados em eletroforese em gel. A análises in vitro, realizou-se inicialmente pelo
teste de patogenicidade em 30 tambaquis juvenis, divididos em 6 grupos, foi inoculado 0,5
mL dos isolados na cavidade celomática, onde verificou-se que não houve mortalidade
e/ou alterações clínicos comportamentais ou teciduais em todos os animais. Na
larvicultura foi verificado melhor no desempenho zootécnica nas cepas I3 e M1 3 em
relação ao controle; sem alteração do desenvolvimento morfofisiológico. A sepse induzida
nas larvas verificou-se melhora na sobrevida e na imunidade inata das larvas
suplementadas com M1 3 e M1 4. Os resultados preliminares obtidos nos testes vêm
mostrando que os isolados, pertencentes ao gênero Lactobacillus, apresentam
características de potenciais probióticos para larvas de tambaqui. A prospecção de suas
potencialidades tecnológicas e funcionais é de extrema importância para a produção
aquícola sustentável.
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Palavras-chave
Citação
SANTOS, Thayná Moura dos. Prospeção e uso de probióticos autóctone isolados do intestino de
Colossoma Macropomum no desempenho zootécnico e na profilaxia da aeromonose na larvicultura de Tambaqui. Orientador: Gustavo da Silva Claudiano; Co-orientador: Michelle Midori Sena Fugimura. 2023. 87 f. Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Oeste do Pará, Instituo de Biodiversidades e Florestas, Programa de Pós-Graduação em Biociências, Santarém, 2023. Disponível em: https://repositorio.ufopa.edu.br/handle/123456789/1669